Die beiden einzigen Vertreter der Frauen-Bundesliga in der ersten DFB-Pokal-Hauptrunde haben Gegner aus der 2. Liga vermieden. Während Aufsteiger FC Carl Zeiss Jena zum hessischen Regionalligisten TSV Jahn Calden reisen muss, tritt der zweite Aufsteiger 1. FC Köln beim viertklassigen TSG Lütter an. Die zehn bestplatzierten Teams der zurückliegenden Spielzeit der Bundesliga haben ein Freilos und greifen erst in der zweite Runde in den Wettbewerb ein.

Die ehemalige Nationalspielerin Doris Fitschen loste die insgesamt 22 Partien der ersten Pokalrunde in der DFB-Zentrale in Frankfurt am Main. Die Auftaktrunde wird am Wochenende 21./22.08.2021 ausgetragen.

Die beiden einzigen fünftklassigen Teams bekamen nur einmal Heimrecht. Die Spvgg Herne-Horsthausen empfingt dabei Zweitligaaufsteiger SV Henstedt-Ulzburg, während der TuS Immendorf auswärts bei den Sportfreunden Siegen spielen muss.

Zum Nordderby kommt es außerdem im Duell zwischen Holstein Kiel und dem Hamburger SV.